Гетерологичная экспрессия ацетилхолинэстераз колорадского жука Leptinotarsa decemlineata в бактериях Escherichia coli и получение антител к отдельным формам фермента
Ключевые слова:
колорадский жук, Leptinotarsa decemlineata, ацетилхолинэстераза, гетерологичная экспрессия, поликлональные антитела, иммуноблоттингАннотация
Колорадский жук Leptinotarsa decemlineata является широко распространенным вредителем пасленовых (сем. Solanaceae). Огромный экономический ущерб, вызываемый этим видом по всему миру, усиливается способностью L. decemlineata приобретать устойчивость к основным классам инсектицидов. Ранее такую устойчивость связывалась с мутациями в гене, кодирующим LdAChE2 – ортолог ацетилхолинэстеразы Drosophila melanogaster. Однако обнаружение у колорадского жука и многих других видов насекомых второй формы фермента LdAChE1 заставило пересмотреть эти представления. С целью сравнения роли двух форм ацетилхолинэстеразы в физиологии колорадского жука и его устойчивости к инсектицидам, кДНК копии обоих генов были клонированы и экспрессированы в E. coli. Иммуноблоттинг с поликлональными антителами против выделенных рекомбинантных белков показал отсутствие перекрестной реакции, более низкое содержание LdAChE1 в тканях имаго колорадского жука по сравнению со второй формой и ассоциацию LdAChE2 с мембранами. В дальнейшем планируется использовать полученные антитела для иммуноаффинной очистки природных форм фермента из тканей жука, а также после экспрессии активных форм в культуре клеток насекомых. Это поможет в оценке роли LdAChE1 и LdAChE2 в физиологии вредителя и в приобретении им устойчивости к инсектицидам.
